КЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ПРЕПАРАТА ГЕПАКАРДИН НА СОБАКАХ СТАРШЕЙ ВОЗРАСТНОЙ ГРУППЫ
CLINICAL TRIAL OF THE PREPARATION HEPACARDIN IN DOGS OF THE SENIOR AGE GROUP

УДК 619:615.038
Ключевые слова: гепакардин, ветеринарная гериатрия, гепатопротектор, кардиопротектор, антиоксидант
Key words: hepacardin, veterinary geriatrics, hepatoprotector, cardioprotector, antloxidant

Глотова Светлана Вячеславовна, аспирант каф. фармакологии и токсикологии². Тел. (812) 232-55-92
Glotova Svetlana V., Pharmacology and Toxicology Dept. Postgraduate². Tel. +7 (812) 232-55-92
Чуваев Игорь Валерьевич, канд. биол. наук, главный врач1. Тел.: (812) 232-55-92
Chuvaev Igor V., Ph.D. in Biology Science, Chief Veterinary Physician¹. Tel.: +7 (812) 232-55-92
Андреева Надежда Лукояновна, проф., докт. биол.наук, зав. каф. фармакологии и токсикологии². Тел.: (812) 387-11-58
Andreeva Nadezhda L., Professor, Doctor of Biology Scinece, Head of Pharmacology and Toxicology Dept.². Tel.: +7 812 387-11-58

Институт Ветеринарной Биологии¹, Санкт-Петербург / Institute of Veterinary Biology¹, Saint-Petersburg
ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»², Санкт-Петербург / Saint-Petersburg State Academy of Veterinary Medicine², Saint-Petersburg

Аннотация. Применение препарата гекпакардин (30 дней из расчета 1 капсула на 10 кг массы тела два раза в день, внутрь) собакам старше 10 лет с различными заболеваниями сердца, печени, костно-суставной системы, приводило к нормализации в сыворотке крови активности АЛТ, АСТ, щелочной фосфатазы; снижало до нормальных значений содержание билирубина, малонового диальдегида, диенкетоны в крови. В значительной степени улучшалась двигательная активность животных.
Summary. Application of the preparation Hepacardin (within the period of 30 days at 1 capsule per 10 kg body mass twice a day, orally) in dogs over 10 years of age with different heart, liver diseases, diseases of osteoarticular system led to normalization of the activity of ALT, АсАТ, alkaline phosphatase in blood serum; lowered bilirubin, malondialdehyde, dienketones content in blood to normal value. Motion activity of animals improved considerably.

Введение

Согласно исследованиям, проведенным ранее, установлено, что в последние годы возросло относительное число посетителей ветеринарных клиник с возрастными собаками, т. е. с собаками в возрасте от 7–8 лет и старше [10].

В связи с этим разработка и создание гериатрических препаратов для домашних животных становится актуальной задачей ветеринарной фармакологии. Препараты данной группы позволят не только комплексно профилактировать и лечить болезни, возникающие в старости, но и продлевать срок активной и полноценной жизни животных [9].

Ранее был разработан и создан препарат ЧИН 3607 (гепакардин), включающий в себя экстракты растительного и животного происхождения. Доклинические исследования свойств препарата выявили его высокую безопасность [3] и эффективность на различных моделях поражения печени и миокарда [4, 8]. Кроме того, учитывая свойства компонентов, входящих в состав препарата, предполагается выраженный хондропротекторный эффект.

Целью настоящего исследования было изучение терапевтических свойств препарата гепакардин на собаках старше 10 лет.

Материалы и методы

Исследование было выполнено на базе приюта для собак Санкт-Петербурга. В исследовании участвовало 10 собак в возрасте 11–15 лет; среди них 4 суки и 6 кобелей, все беспородные. Собаки в течение всего периода наблюдения содержались в одинаковых условиях, получали готовый сухой корм. Препарат давали вместе с кормом из расчета 1 капсула на 10 кг живой массы 2 раза в день в течение месяца. Полный клинический осмотр животных, клинический анализ крови и контроль биохимических показателей крови проводили на момент начала и окончания исследования.

Оценку биохимических показателей крови, таких как АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, креатинин, общий билирубин, общий белок, кальций и фосфор, осуществляли колориметрическим методом с использованием биохимического анализатора Stat Fax 1904 Plus (США) и стандартных наборов импортного и отечественного производства.

Уровень перекисного окисления липидов оценивали следующим образом: концентрацию малонового диальдегида определяли методом с тиобарбитуратовой кислотой, концентрацию диеновых конъюгатов и диенкетонов определяли модифицированным методом Плацера с соавтор. [5] на кафедре биохимии СПбГАВМ. Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием критерия Стъюдента. Поведение животных, аппетит и потребление воды контролировали ежедневно.

Результаты и обсуждение

На момент начала исследования у всех собак был хороший аппетит, оформленный стул, отсутствовали признаки обезвоживания, а также полидипсии – полиурии.

При первичном клиническом осмотре было установлено следующее. Упитанность у собак №№ 1, 5, 6, 7, 8, 9 – нормальная; №№ 2, 3, 4 – ожирение; № 10 – понижена. Состояние шерстного покрова: у собак №№ 2, 3, 4, 5 отмечена жирная себорея; у остальных – нормальное. Цвет слизистых оболочек у собак №№ 2 и 5 иктеричный, у остальных животных – розового цвета. При аускультации грудной полости у собак №№ 1, 5, 7, 8, 10 были выявлены глухие сердечные тоны, у №№ 5, 6, 9, 10 – аритмия, у №№ 1, 10 – сердечный шум. Дыхание у всех собак при аускультации было везикулярным. При пальпации брюшной полости болезненность в области почек была выявлена у собаки № 1 , болезненность в области печени – у собак №№ 2, 5, 10, увеличение границ печени – у собак №№ 2, 3 и 5. У собаки № 7 были выявлены сильная болезненность и крепитация при движении левого скакательного сустава, клинические признаки остеоартроза. Болезненность при движении суставов, скованность в движениях, периодическая хромота были отмечены у всех собак. Результаты первичного биохимического и клинического анализов крови собак наблюдаемой группы (на момент начала исследования) представлены в таблицах 1 и 2.

Анализируя результаты биохимических исследований (на начало испытания), представленные в таблице 1, следует отметить значительное увеличение показателей АЛТ, щелочной фосфатазы и билирубина в сыворотке крови данной группы животных, что может свидетельствовать о нарушении целостности, а, следовательно, и функции гепатоцитов (внутри- и внепеченочный холестаз, токсические поражения гепатоцитов, недостаточность синтетических процессов в печени, воспалительные процессы, а также возрастные изменения в паренхиме органа).
При заболеваниях, ведущих к повреждениям клеток, насыщенных АЛТ (гепатоциты, клетки почек, миокард и пр.), аланинаминотрансфераза выбрасывается в кровь – повышается уровень АЛТ. По результатам анализов на уровень АЛТ в комплексе с АСТ (т. е. печеночные пробы) чаще судят о патологических процессах в печени. В связи с тем, что специфическая активность АЛТ в печени почти в 10 раз выше, чем в миокарде и скелетной мускулатуре, повышенная активность этого фермента в сыворотке рассматривается как индикатор поражения паренхимы печени. При различных гепатопатиях уровень АЛТ может превышать норму в несколько раз.

Гипербилирубинемия при нормальном уровне эритроцитов (что исключает гемолитическую желтуху) может быть результатом пониженной способности к метаболизму и транспорту против градиента в желчь билирубина гепатоцитами (паренхиматозные желтухи), а также следствием механических затруднений желчевыделения (обтурационные – застойные, механические, холестатические желтухи).

Фермент щелочная фосфатаза присутствует во всех органах животных, высокая активность определяется в печени, остеобластах и кишечном эпителии. Патологическое повышение активности ЩФ наблюдается чаще всего при холестазе и при некоторых заболеваниях костей. При этом следует отметить, что значительное увеличение биохимических показателей, характеризующих состояние печени, было не только по суммарно среднему значению всей выборки животных, но и у каждого животного в отдельности:

• уровень АЛТ в сыворотке крови животных на момент начала испытания только у двух собак в пределах нормы (до 70 Е/л), у шести собак – от 70 до 100 Е/л, у двух собак – выше 100 Е/л; в целом по группе уровень АЛТ составил от 67,3 до 282,8 Е/л;
• уровень щелочной фосфатазы в сыворотке крови животных на момент начала испытания у всех собак был больше нормы (выше 120 Е/л) – от 163,7 до 434,6 Е/л;
  
• уровень общего билирубина в сыворотке крови животных на момент начала испытания в пределах нормы был лишь у двух собак (до 8 мкмоль/л), у пяти собак – от 8 до 15 мкмоль/л и у трех – выше 15 мкмоль/л; в целом по группе уровень общего билирубина составил от 7,1 до 31,2 мкмоль/л.
  

Уровень АСТ (аспартатаминотрансферазы) на момент начала исследования у семи собак был выше нормы (больше 70 Е/л): у трех – от 70 до 100 Е/л и у четырех – от 100 до 250 Е/л; в целом по группе уровень АСТ составил от 62,3 до 250 Е/л. Наиболее высокая активность АСТ отмечена в печени, нервной ткани, скелетной мускулатуре, миокарде. При инфаркте миокарда активность АСТ в 95 % случаев повышена в первую неделю после приступа. Активность данного фермента значительно повышается также при заболеваниях гепатобилиарной системы и повреждениях скелетной мускулатуры.

Уровень кальция и фосфора в сыворотке крови у большинства животных был в пределах нормы: Са – от 1,9 до 2,4 ммоль/л; Р – у восьми животных 2,0–3,0 ммоль/л, а двух собак выше нормы – 3,0–4,9 ммоль/л.

В организме животных большая часть кальция содержится в костной ткани и зубах. Ионы кальция играют важную роль при передаче нервных импульсов, являются кофактором многих ферментов, необходимы для поддержания нормальной сократимости мышц, процесса свертывания крови.
Повышение уровня фосфора в сыворотке крови может говорить о остеопорозе, распаде костной ткани, а также при циррозе печени, почечной недостаточности.

Обмен фосфора и кальция тесно взаимосвязаны, и при оценке уровня кальция и фосфора в крови следует обращать внимание не только на их количество в крови, но и на их соотношение. Считается [7], что оптимальным является соотношение между кальцием и фосфором (Са : Р), равное 1,5 : 1. Гиперкальциемия, снижая секрецию паратиреоидного гормона, стимулирует реабсорбцию фосфатов. Фосфат может соединяться с кальцием и приводить к отложению кальция в тканях и гипокальциемии.

На момент начала исследования соотношение Са : Р в сыворотке крови в среднем составляло 1 : 1,25, что может свидетельствовать о нарушении кальце-фосфорного обмена.

Показатели перекисного окисления липидов (ПОЛ) – малоновый диальдегид и диенкетоны в сыворотке крови собак на момент начала испытания были выше нормы (больше 20 мкмоль/л и 0,1 едА/мл соответственно); в целом по группе уровень малонового диальдегида составил от 22,5 до 40,0 мкмоль/л, а уровень диенкетонов – от 0,14 до 0,3 едА /мл. Увеличение концентрации маркеров перекисного окисления липидов – малонового диальдегида и диенкетонов происходит с возрастом [1], что связано с ослаблением антиоксидантной защиты организма (снижение уровня витаминов С, Е, А, а также активности ферментов-антиоксидантов – супероксиддисмутазы и каталазы).

Также известно, что в условиях кислородного голодания тканевых структур происходит перестройка внутриклеточного метаболизма с ограничением аэробных и преобладанием анаэробных процессов, при этом активируется протеолиз, развивается внутриклеточный ацидоз, которые, в свою очередь, вызывают повреждения цитомембран, сопровождающиеся инициацией перикисного окисления липидов [6] и накоплением в жидких средах его продуктов: малонового диальдегида, диеновых и триеновых конъюгатов, гидроперикисей липидов, диенкетонов [2]. Таким образом, повышение этих веществ в сыворотке крови может указывать на наличие метаболических нарушений в различных органах и тканях организма (в ЦНС, печени, почках и т. д.).

Показатели клинического анализа крови животных, проведенного в начале исследования, были в пределах нормы: уровень эритроцитов был в диапазоне 4,6–6,8 (1012/л), лейкоцитов – 8,1–18,7 (109/л), гемоглобин – 127,7–247,2 г/л, цветной показатель – 0,9–1,3, СОЭ – 1–6 мм/ч.

Клинический осмотр животных на момент окончания исследования выявил следующее.

1. В период проведения испытания аппетит у всех собак оставался хороший, стул оформленный, признаков полидипсии – полиурии не наблюдалось.
2. Были отмечены изменения в поведении: собаки стали более активные, подвижные.
3. Слизистые оболочки у всех собак при вторичном осмотре были розового цвета.
4. У собак №№ 2, 3, 4, 5 отмечено улучшение состояние шерстного покрова, отсутствие себореи.
5. Упитанность у всех собак осталась прежняя.
6. Состояние сердца при аускультации у собак осталось без явных изменений, за исключением животных №№ 5, 6, у которых отмечено улучшение ритма сердечных тонов.
7. При пальпации брюшной стенки болезненности в области печени, почек у собак не выявлено. Границы печени у собаки № 3 остались на прежнем уровне.
8. Улучшение опорной и динамической функций конечностей наблюдалось у всех собак.

Данные повторного клинического и биохимического анализов крови собак представлены в таблицах 1, 2.

Таблица 1. Некоторые биохимические показатели крови собак на момент начала и окончания приема гепакардина (N+_n)

Таблица 2. Показатели клинического анализа крови собак (среднее значение) на момент начала и окончания приема гепакардина

Как представлено в таблице 1, применение препарата гепакардин в дозе 1 капс./10 кг массы 2 раза в день привело к снижению до нормальных значений таких показателей крови наблюдаемых животных, как: АЛТ, АСТ, щелочная фосфатаза, общий билирубин. Что может свидетельствовать о восстановлении целостности и функции гепатоцитов и, возможно, кардиомиоцитов.

Так, при повторном взятии крови через месяц после приема препарата:

• уровень АЛТ в сыворотке крови стал в пределах нормы (до 70 Е/л) у 7 собак, в пределах от 70 до 101,0 Е/л – у трех собак; в среднем по группе уровень АЛТ снизился на 46,4 % от исходного значения;
• уровень щелочной фосфатазы в сыворотке крови стал в пределах нормы (до 120 Е/л) у 6 собак, а у остальных четырех – в пределах от 120 до 198,5 Е/л; в среднем по группе уровень щелочной фосфатазы снизился на 49,5 % от исходного значения;
• уровень общего билирубина в сыворотке крови стал в пределах нормы (до 8 мкмоль/л) у 8 собак, однако у двух оставался немного повышенным (до 13,7 мкмоль/л); в среднем по группе уровень общего билирубина снизился на 55,29 % от исходного значения;
• уровень АСТ в сыворотке крови у всех животных стал в пределах нормы (до 70 Е/л); в среднем по группе уровень АСТ снизился на 75,9 % от исходного значения.

Это может свидетельствовать о гепато- и кардиопротекторном действии препарата гепакардин.

Уровень креатинина, уровень общего белка в течение исследования достоверно не изменились и остались в переделах нормы. Содержание кальция в крови собак через месяц применения препарата гепакардин увеличилось на 15,5 % по сравнению с начальным уровнем. В связи с чем данный препарат, видимо, можно рекомендовать в качестве дополнительного источника кальция для животных. Кроме того, изменилось соотношение Са : P – 1,25 : 1, что может говорить о нормализации кальце-фосфорного обмена у животных.

Содержание в крови собак малонового диальдегида и диенкетонов (продукты перекисного окисления липидов в организме) достоверно снизилось и приблизилось к нормальным значениям:

• уровень малонового диальдегида в сыворотке крови испытуемых животных стал в пределах нормы (до 20 мкмоль/л) у трех собак, а у остальных данный показатель оказался в пределах до 27,8 мкмоль/л; в среднем по группе уровень малонового альдегида снизился на 26,2 % от исходного значения;
• уровень диенкетонов в сыворотке крови испытуемых животных стал в пределах 0,09–0,2 едА/мл); в среднем по группе уровень диенкетонов снизился на 35 % от исходного значения.

Снижение концентрации в крови продуктов перекисного окисления липидов может говорить о высокой антиоксидантной активности препарата гепакардин, связанной, скорее всего, со свойствами компонентов, входящих в состав препарата, способных повысить уровень антиоксидантной защиты организма.

Показатели клинического анализа крови собак на момент начала испытания существенно не отличались через месяц применения препарата и оставались в пределах нормы.

Выводы

1. Тридцатидневный курс применения препарата гепакардиин в терапевтической дозе (1 капсула на 10 кг живой массы 2 раза в день) способствует восстановлению опорных и двигательных функций конечностей собак, больных остеоартрозом.
2. Тридцатидневный курс применения препарата гепакардиин в терапевтической дозе (1 капсула на 10 кг живой массы 2 раза в день) вызвал снижение в сыворотке крови уровня АСТ в 4,1 раза, АЛТ – в 2 раза, щелочной фосфатазы – в 1,9 раз, общего билирубина – в 2,2 раза, приведя их к значениям, характерным для здоровых собак.
3. Применение препарата гепакардиин в течение месяца в терапевтической дозе (1 капсула на 10 кг живой массы 2 раза в день) не вызывал у собак достоверных изменений уровня креатинина, общего белка в сыворотке крови.
4. Применение препарата гепакардиин в течение месяца в терапевтической дозе (1 капсула на 10 кг живой массы 2 раза в день) не оказал влияния на показатели клинического анализа крови собак (количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина, цветной показатель, СОЭ).
5. Тридцатидневный курс применения препарата гепакардин в терапевтической дозе (1 капсула на 10 кг живой массы 2 раза в день) вызвал нормализацию показателей перекисного окисления липидов, таких как малоновый диальдегид и диенкетоны, снижая их уровень на 26,2 % и на 35 % соответственно.

Список литературы

1. Бахта, А. А. Возрастные особенности антиоксидантного статуса организма собак / А. А. Бахта // Ученые записки Казанской гос. академии ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана. – Т. 185. – Казань, 2006. – С. 13–17.
2. Бурмистров, С. О. Перикисное окисление липидов, белков и активность антиоксидантной системы сыворотки крови новорожденных и взрослых. / С. О. Бурмистров и соавт. // Акушерство и гинекология. – 1997, – № 6. – с. 36–39.
3. Глотова, С. В. Изучение острой и хронической токсичности препарата ЧИН 3607 (гепакардин) / С. В. Глотова // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – № 2 (2). – СПб, 2009. – С. 15.
4. Глотова, С. В. Изучение противотоксических свойств препарата ЧИН 3607 на модели острого гепатита / С. В. Глотова, И. В.Чуваев, Н. Л. Андреева // Ветеринарная практика. – № 3 (42). – СПб, 2008.
5. Камышников, В. С. Клинико-биохимическая лабораторная диагностика / В. С. Камышников. – Т. 1. – Минск, 2003. – С. 230.
6. Лукьянова, Л. Д. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние / Л. Д. Лукьянова и соавт. – М., 1982. – 301 с.
7. Смоляров, В. И. Рациональное питание / В. И Смоляров. – Киев, 1991. – С. 156.
8. Чуваев, И. В. Изучение гепатопротекторных свойств препарата ЧИН 3607 на модели острого гепатита / И. В. Чуваев, В. Д. Соколов, С. В. Глотова // «Эффективные и безопасные лекарственные средства». I международный конгресс ветеринарных фармакологов : [материалы]. – СПб, 2008.
9. Чуваев, И. В. Необходимость изыскания гериатрических средств для плотоядных / И. В. Чуваев, В. Д. Соколов, С. В. Глотова // XIX Международная научно-практическая конференция по фармакологии и токсикологии : [материалы]. – СПб, 2007.
10. Чуваев, И. В. Сравнительный анализ обращений владельцев собак в клинику ООО «Институт Ветеринарной Биологии» за 1998–2008 гг. / И. В. Чуваев, В. Д. Соколов, С. В. Глотова // «Эффективные и безопасные средства в ветеринарии». Всероссийского съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов : [материалы]. – 2009. – С. 90